细胞培养操作指南

405 人阅读发布时间：2023-10-06 20:13

贴壁细胞传代

1. 从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃；

2. 用不含钙、镁的平衡盐溶液冲洗细胞（每10cm 2培养表面积约2mL溶

液）；从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液，以避免搅动细胞

层，前后摇晃容器数次（注：冲洗步骤可去除可能抑制解离剂作用的少量

血清、钙和镁）；

3. 从培养容器中吸出冲洗液并丢弃，向培养瓶中加入预热的解离剂；试剂

量应足以覆盖细胞层(每10cm²大约0.5mL)；

4. 轻轻摇晃容器，使试剂完全覆盖细胞层；吸出多余解离试剂，T25 细胞

培养瓶留 200ul 左右即可；

5. 将培养容器在室温下孵育约 2分钟（请注意实际孵育时间根据所用细胞

系不同而有所差异）；

6. 在显微镜下观察细胞解离情况；如果解离程度未达 90%，可将孵育时间

延长几分钟，每 30 秒钟检查一次解离情况；也可轻轻拍打培养容器以

加快细胞解离；

7. 细胞解离程度大于等于 90%时，倾斜培养容器，使细胞上液体尽快流

尽；加入所用解离剂两倍体积的预热完全生长培养基；吹打细胞层表面

数次，使培养基分散；

资料格式：

上海富雨生物细胞培养操作指南.pdf

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