新品发布 TG1感受态细胞

TG1感受态细胞

 

产品信息：
组成	BC120-01	BC120-02
TG1	100ml×10	100ml×20
pUC19 质粒	5ml	5ml

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。产品介绍：
TG1 菌株来源于大肠杆菌 K-12，生长速度快，主要用于噬菌体展示（Phage Display），也可进行 M13 噬菌体相关的实验，也可用于普通质粒的克隆构建及提取。lacZΔM15 的存在可进行α互补原理上的蓝白斑筛选实验。由于该菌株不含核酸酶 endA1 突变， 提取的质粒中核酸酶含量较高，需用去蛋白液处理。TG1 感受态细胞由特殊工艺制成，经 pUC19 质粒检测转化效率高达 108cfu/μg DNA。
基因型：supE thi-1 _(lac-proAB) _(mcrB-hsdSM)5(rK– mK–) [F´ traD36 proAB lacIqZ _M15]
菌株抗性：对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、博莱霉素、庆大霉素、氯霉素和四环素敏感。质粒转化步骤：（以氨苄青霉素抗性的 pUC19 质粒为例）

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的质粒 DNA 到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。
2. 冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。
3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动。
4. 冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。
5. 加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。
6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养 60 分钟。
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 37℃培养 12-24 小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块， 取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。）

注意事项：

1. 化冻的感受态细胞不能长时间放置，影响转化效率；
2. 感受态细胞避免反复冻融；
3. 操作过程要轻柔，避免用移液枪反复吹打；
4. 整个转化过程应注意无菌操作，避免污染。

 

 

相关试剂配置表：
SOC 培养基：SOB+20mM 葡萄糖

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