BL21 Star(DE3)感受态细胞

BL21 Star(DE3)感受态细胞

产品规格:

BL21 Star(DE3)	20×100μl
pUC19(control vector)	10pg/μl                  10μl

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm rne131 (DE3) High5^TM系列BL21 Star(DE3)感受态细胞来源于BL21(DE3)菌株，含有rne131基因突变体，rne131突变基因能够增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而提高蛋白表达能力。
主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达。 High5^TM系列BL21 Star(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率达10⁷cfu/μg。
 

1.  取100μl冰上融化的BL21 Star(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.   42℃水浴热激90秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.  向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4.   5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2.  混入质粒时应轻柔操作。
3.  转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.  诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

     5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间、温度以及IPTG浓度需实验者优化。

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