感受态细胞

感受态细胞

产品介绍：

本公司生产的 DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌 DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的化学转化。使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 108 cfu/µg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。

基因型：

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

产品特点：

一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型株。其φ80 lacZΔM15  基因的产物可与 pUC
载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。操作步骤（以下操作均按无菌条件的标准进行）：

提示

1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。
   1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。

（一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用 DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。)以下实验以 100μl 感受态细胞为例。

1. 1. 向感受态细胞悬液中加入目的 DNA  ，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置 30 分钟。
   2. 将离心管置于 42℃水浴中放置 60 秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2 分钟，该过程不要摇动离心管。（此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置5-8分钟左右；如果室温较低，可延长时间至 8-15 分钟左右。条件允许建议使用 42℃热激方法。）
   3. 向每个离心管中加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃， 150rpm，摇床振荡培养 60 分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

1. 1. 无菌条件下，取适量菌液加到含相应抗生素的 LB 固体培养基平板上，用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。（涂布用量可根据具体实验来调整。转化质粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；连接产物的转化菌液建议离心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。）
   2. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。

（质粒快速转化步骤：将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟，对于氨苄青霉素抗性的质粒，步骤 3 完成后， 直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。）

联系电话：18956075901 （同微信） ，QQ： 3375724714