上海富雨生物科技有限公司

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质粒DNA的转化实验操作步骤
转化活性是检测质粒生物活性的重要指标,在基因克隆技术中,转化(transformation)是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA(包括人工染色体)导入细胞的过程, 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态,用于转化的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株,以防止对导入的外源的切割,用 R- M- 符号表示。 此外,为了便于检测,受体菌一般应具有可选择的标记(例如抗生素敏感性、颜色变化等)。 但质粒 DNA 能否进入受体细胞则取决于该细胞是否处于感受态(competence)。所谓感受态是指受体细胞处于容易吸收外源 DNA 的一种生理状态,可通过物理化学的方法诱导形成,也可自然形成(自然感受态)。 在基因工程技术中,通常是采用诱导的方法。 大肠杆菌是常用的受体菌,其感受态一般是通过用 CaCl2 在 0℃ 条件下处理细胞而形成,基本原理是: 细菌处于 0℃ 的 CaCl2 低渗溶液中,会膨胀成球形,细胞膜的通透性发生变化,转化混合物中的质粒 DNA 形成抗 DNase 的羟基一钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经 42 ℃ 短时间热激处理,促进细胞吸收 DNA 复合物,在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增殖,在选择培养基上便可获得所需的转化子。

108 人阅读发布时间:2024-03-19 08:25

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