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　一、称量错误 　　天平称量不准确、计算称量错误导致配制培养基的浓度不正确，都有可能导致岀现部分沉淀。 　　二、水质不佳 　　多数培养基的制备需要使用纯化水、去离子水配制，而天然水中含有含有较多的矿物盐离子，若错误的使用了自来水，矿泉水配制，或使用的纯化水离子δ除净，都有可能导致培养基灭菌后岀现浑浊现象或沉淀（磷酸盐含量高的培养基更易出现此类问题。

贮存环境：贮存室应尽量设置空调设施，保证室内阴凉、干燥、避光、通风，温度在25±5℃，相对湿度在50%～75%为宜。特殊品种要求严格按照规定的贮存条件妥善保存。 　　标准品应放在干燥器或其它适宜容器中保存，每一个干燥器或容器外应有区别于标准品编号的特殊编码，以示存放位置。干燥器置于专用的柜中，依次排列整齐，并由专人管理。 　　标准品的贮存期：一般按标准品的规定贮存期限执行，没有期限的原则上化学提纯物标准品为3年，生物试剂和不稳定的以6～12个月为宜。 　　标准品贮存应由管理员每天上下午各检查1次温度、湿度并做记录。凡不符合规定要求的，应及时调整纠正。多雨季节时，保管员要增加检查频次。

标准品的标定主要有两个流程，一是初步标定，二是正式标定。远慕生物针对标准品的标定结果做出总结，下面我们一起来看，处理标准品的标定结果请遵循这四个步骤： 第一：如该药物没有可进行等当量换算并符合要求的容量法时，可采用反复纯化的原料，色谱法确定纯度后扣除有关物质、炽灼残渣、水分和挥发溶剂等后的理论含量确定为标准品含量，以此为基准进行对照品(标准品)的换代和量值传递。 第二：用于抗生素微生物检定法的代基准标准品可参照上述方法标定，如为多组份抗生素，其组份比例应与拟上市产品组份比例一致或接近，或以其中某一组份纯品为基准标准品，但要注意标准品换代时量值传递的恒定。 第三：仅用于鉴别定性的化学对照品，注重其结构确证的研究资料，纯度和含量的要求一般可适当降低。 第四：杂质对照品，用作限度要求时，应提供其来源(合成路线)、结构确证的研究资料，应具备较高的纯度和含量，并提供纯度和含量的的测定结果，提供质量控制标准。

在日常分析实验中我们经常会用到标准品，那么，什么是标准样品?它在标准化工作中占据什么样的地位?它又是怎么分类的呢?这些是每一个分析实验人员都会遇到的问题，对于标准品你足够了解吗?接下来远慕来一一介绍。 《标准样品常用术语和定义》和参照采用该导则的GB/T15000.2<标准样品工作导则(2) 标准样品常用术语和定义>中是这样定义标准样品的： 具有一种或多种足够均匀的和足够好确定了特性的材料和物质，它用以对仪器的校准、对检测(分析)方法的评定和对材料的赋值。

在评价样品纯度之前，首-先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质，进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征）。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是，上述说明中并没有要求描述杂质的性质。纯化过程可能已将某一杂质的浓度降低到检测下限以下，但色谱峰中还有残留。毫无疑问，表观纯度取决于所选择的测定方法及其灵敏度。由于大多数分离方法都能够有效地去除非蛋白质类杂质，因此本文将主要介绍蛋白质样品中蛋白质类杂质的检测方法。 　　目前有一些高灵敏度的方法可用于检测样品中的杂质。其中每种方法测定分子的一种特定物理特性。方法的选择依赖于以下标准:①可用于检测的蛋白质的量；②待测杂质的性质;③所需的检测精度;④所需的检测灵敏度;⑤可能干扰到该方法的蛋白质及其溶剂特性。蕞为简单和常用的方法是，经一次或多次分离后证实只有一种组分可被检测到。若纯度标准为只可以存在一种可检测物质，则需用多种分离手段检测杂质。

1. 蛋白结构 　　a) 蛋白质的一级结构及疏水氨基酸的相对数目对蛋白质的聚集速率和聚集体的稳定性有较大的影响。疏水氨基酸会形成聚集倾向区域(aggregation-prone region),在特定位置引入一个新的或不同的疏水氨基酸会显著加快蛋白聚集速率。 　　b) 糖基化对于许多蛋白质的稳定性具有重要意义,如CH2结构域的糖基化可以稳定CH2结构域及整个单抗分子。因此去糖基化可能会干扰单抗的三级结构,进而加速热诱导聚集。甚至蛋白质中糖的结构也会因为改变蛋白质构象稳定性而对蛋白质的聚集产生影响。 　　c) 蛋白质的二级结构在蛋白质聚集过程中也会发挥一定的作用。研究发现冻干诱导的蛋白质聚集与β-折叠结构有关,而与非极性表面积无关。同时二级结构也会影响巯基-二硫键的交换速率,进而引起分子间形成二硫键而导致聚集。 　　d) 蛋白的三级结构对蛋白质的聚集也有一定的影响。尽管聚集倾向区域对蛋白质聚集有重要的影响,但若它们被适当的包埋,也依旧会减小蛋白质的聚集。

常见问题：1.该细胞对培养基及血清的质量要求较高，其中任何一个质量不好都会导致后续培养过程中细胞的分化，特别是传3、4代以后细胞容易出现分化，细胞变大，贴壁较紧，呈典型“摊鸡蛋”样；2.该细胞在传代或复苏后，刚贴壁时会有短小的突触，但细胞胞体还是呈圆形或近圆形；待细胞培养2-3天后，短小突触会消失；3.如果用胰酶消化，经验不足时，极易导致后续细胞形态的改变，也不容易将细胞消化下来；4.如果用细胞刮将细胞刮下来，容易导致大量细胞死亡和细胞形态的改变，也不容易分散为单细胞；5.该细胞不管在任何密度下，只要是更换了新鲜培养基后紧接着进行吹打，细胞会很难从培养瓶壁上脱落。

细菌L型在体内或体外、人工诱导或自然情况下均可形成，诱发因素很多，如溶菌酶（lysozyme）、溶葡萄球菌素（lysostaphin）、青霉素、胆汁、抗体、补体等。其中溶菌酶和溶葡萄球菌素能裂解肽聚糖中N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β-1,4糖苷键，破坏聚糖骨架。青霉素能与细菌竞争合成肽聚糖过程中所需的转肽酶， 抑制四肽侧链上D-丙氨酸与五肽桥之间的联结，使细菌不能合成完整的肽聚糖。人与动物细胞无细胞壁，也无肽聚糖结构，故溶菌酶和青霉素对人体细胞无破坏作用。

培养基的组成成分包括三大类：营养物质、凝固物质、抑制剂和指示剂。 　　（一）营养物质 　　尽管不同的细菌对营养的要求不同，但细菌需要的营养物质应含有水、氮源、碳源、无机盐类和生长因子等，常用的营养物质如下： 　　1.蛋白胨：蛋白胨是制备培养基时最常用的成分之一，提供细菌生长繁殖所需要的氮源。是动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而成。植物胨和动物胨各有优点，配制培养基常将两者按一定比例混合使用，提高培养基的营养价值。蛋白胨易溶于水，遇酸不沉淀，不因受高温而凝固，并为两性电解质有缓冲作用。但吸水性强，应注意干燥密封保存。

首先,应该先根据需要的浓度计算,用小量筒量取一定的浓盐酸,溶解于一定量的蒸馏水中,并保存在细口瓶中. 　　标定盐酸溶液,应该先在分析天平上称取准确量的碳酸钠（或硼砂）基准物质标准,溶解于小烧杯中,并定量转移到容量瓶中,定容.用盐酸滴定碳酸钠标准溶液,用甲基橙做指示剂,即可标定出盐酸的浓度.

自行配制的标准溶液必须具备8个基本要求 　　1.1 应采用具有高纯度的溶质或基准物质(如金属、金属氧化物或金属化合物；酸、碱、金属有机化合物、适宜的盐类、有机溶剂等)。 　　1.2 为确保配制标准溶液的可靠性、准确性,实验室的设备、环境设施均应满足其要求,(应有监测、控制和记录环境条件。特别对灰尘、电磁干扰、放射、温度、湿度、供电等)。

酶催化化学反应的能力叫酶活力(或称酶活性,active unit)。1961年国际酶学会议规定:1个酶活力单位是指在特定条件(25℃,其它为最适条件)下,在1min内能转化1μmol底物的酶量,或是转化底物中1μmol的有关基团的酶量。 　　影响因素 　　酶活力可受多种因素的调节控制,从而使生物体能适应外界条件的变化,维持生命活动。没有酶的参与,新陈代谢几乎不可能维持。酶的活性指标采用酶活力单位(由米式方程可知:酶促反应速度受酶浓度和底物浓度的影响,也受温度、pH、激活剂和抑制剂的影响。

溶/菌酶（Lysozyme）广泛存在于生物体内，是一类专门作用于 微生物细胞壁的水解酶，已在医学、食品、化妆品、生物工程等多个领域得到广泛应用。溶/菌酶具有抗菌消炎、抗病毒、抗肿瘤、增强免 疫力等作用，尤其是抗微生物作用与传统药物相比具有较为明显的优 势，主要体现在：①对某一病原菌的血清型无选择性，克服了一种抗 生素只能预防一种或其中一种血清型病原菌的不足；②不但能直接溶 解（杀死）细菌和灭活病毒，还能增强机体免疫力而间接发挥抗菌抗 病毒作用；③易吸收，易消化，生物相溶性好、对组织无刺激、无毒 性，不存在药物残留问题。正因为溶/菌酶通过直接和间接两方面机制 发挥抗微生物作用，以及在机体和环境中无残留，所以虽应用多年， 至今仍未出现耐药现象。为了更好的研发利用溶/菌酶，本文对溶菌 酶的剂型、专/利以及在疾病诊疗中的应用作一综述。

标准物质使用中的10大常见问题 　　标准样品(RM)是一种或多种特性值已经很好地被确定的足够均匀的材料或物质，有证标准样品(CRM)是附有证书的标准样品，其一种或多种特性值用建立了溯源性的程序确定，使之可溯源到准确实现用于表示该特性值的计量单位，而且每个标准值都附有给定置信水平的不确定度。 　　在化学分析实验室中标准样品被广泛用于校准仪器、评价测试方法或为材料赋值，标准物质的正确使用和规范管理对保证分析结果的准确性、溯源性有重要意义。

通常，在96孔板的每个孔中加入100微升细胞悬浮液。 从底部附近的井的左侧添加细胞悬浮液。 加入一半平板后，混合细胞悬液，不要再加入，继续加入剩余的一半平板。 添加完所有板后，盖上板，用左手轻轻握住板的左侧，用右手轻轻轻敲板的右边缘，注意抓力(我通常轻敲三次)。 如果它太强或太多次，细胞就会被浓缩和堆积。 顺时针旋转盘子(逆时针效果不好)，依次敲击剩余的三面，静置约5分钟，放入37度培养箱中。 　　对于6孔板、12孔板或24孔板，我在第一个孔中加入少量无血清培养基，摇动并渗透到整个孔的底部，然后用移液管枪将整个孔的底部吸到第二个孔中。用同样的方法渗透到井底，同时模拟其它井，这样整个井底都是湿的，细胞悬浮液将平放在整个井底。 加入细胞悬液时，可以避免中间加入更多细胞，中间加入更少细胞的现象，细胞分散更均匀。 注意，加入细胞悬液后，细胞悬液应放在工作台上静置。这个方法有点慢，但是当你熟练的时候它并不慢。也可以涂抹，但强度不如96孔板，效果不如96孔板，所以我放弃了渗透井底的方法。

糖原是由多个葡萄糖组成的带分枝的大分子多糖，分子量一般在106-107道尔顿，可高达108道尔顿，是体内糖的贮存形式，分子中葡萄糖主要以α-1，4-糖苷键相连形成直链，其中部分以α-1，6-糖苷键相连构成枝链，糖原主要贮存在肌肉和肝脏中，肌肉中糖原约占肌肉总重量的1-2%约为400克，肝脏中糖原占总量6-8%约为100克。肌糖原分解为肌肉自身收缩供给能量，肝糖原分解主要维持血糖浓度。

什么是磷酸化 　　磷酸化是将磷酸基团加在中间代谢产物上或加在蛋白质（protein）上的过程。其中除去磷酸基团的酶称为磷酸酶。 蛋白质磷酸化可发生在许多种类的氨基酸（蛋白质的主要单位）上，其中以丝氨酸为多，接着是苏氨酸。 　　除了蛋白质以外，部分核苷酸，如三磷酸腺苷（ATP）或三磷酸鸟苷（GTP）的形成，也是经由二磷酸腺苷和二磷酸鸟苷的磷酸化而来，此过程称为氧化磷酸化。另外在许多糖类的生化反应中（如糖解作用），也有一些步骤存在氧化磷酸化作用。

胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在 pH 为 8.0 、温度为 37℃ 时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。

1、超净工作台 微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养，那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境。 2、培养箱 培养箱有多种类型，它的作用在于为微生物的生长提供一个适宜的环境。生化培养箱只能控制温度，可作为一般细菌的平板培养;霉菌培养箱可以控制温度和湿度，可作为霉菌的培养;CO2培养箱适用于厌氧微生物的培养。 3、天平 天平用于精确称量各类试剂。实验室常用的是电子天平，电子天平按照精度不同有不同的级别。

1.蛋白胨：蛋白胨是制备培养基时最/常用的成分之一，提供细菌生长繁殖所需要的氮源。是动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而成。植物胨和动物胨各有优点，配制培养基常将两者按一定比例混合使用，提高培养基的营养价值。蛋白胨易溶于水，遇酸不沉淀，不因受高温而凝固，并为两性电解质有缓冲作用。但吸水性强，应注意干燥密封保存。 2.肉浸液：是用新鲜牛肉浸泡、煮沸而制成的肉汁。其中含有可溶性含氮浸出物医|学教育网搜集整理（肌酸、黄嘌/呤、腺嘌呤、次黄嘌/呤核苷酸、谷氨酸、甘氨酸等）和非含氮浸出物（肝糖、乳酸、琥珀酸、磷酸己糖、脂肪、无机盐类等）。还有一些生长因子。肉浸液可为细菌提供氮源和碳源，但肉浸液中所含氮物质过少而不能满足细菌的需要，因此在制备培养基时应再加入1%～2%的蛋白胨和0.5%氯化钠。