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相信从事生命科学研究领域的小伙伴对于Western Blot一定不陌生吧，这是一个步骤繁多的常用基础实验，其中电泳过程至关重要，稍有不慎我们就只能对着 「微笑线」和 「皱眉线」 叹气，而质量好的电泳能让目的条带整齐，结果图让人眼前一亮。电泳的支持介质为聚丙烯酰胺凝胶，该凝胶的聚合则由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体在自由基的催化下完成。 丙烯酰胺介质为网状结构，小孔尺寸与生物大分子具有相似的结构，带负电荷的蛋白，在电场的驱动下从电极负极向正极迁移。分子量大的蛋白滞留在上方，小分子蛋白继续迁移，从而分离不同分子量的蛋白。

细胞爬片是一种将细胞培养在玻璃或塑料表面上，使其附着并扩展的技术。这种技术可以用于观察细胞形态、细胞运动、细胞-细胞相互作用等。我们在做免疫荧光（IF），激光共聚焦(Confocal)，凋亡检测（TUNEL）时，免不了要制备细胞爬片，爬片质量完全决定了最后拍照的质量以及实验数据的精准性。今天，远慕生物就教大家如何制备好的细胞爬片。

什么是酶的抑制剂？ 酶反应抑制剂，简称“抑制剂”。一类能降低酶促反应速率的物质。会使酶的必需基团或活性部位的性质和结构发生改变,从而导致酶活性降低或丧失。按与酶结合的强度和方式,分可逆抑制剂和不可逆抑制剂。 和酶分子以非共价结合而起抑制作用,并可用物理方法将其除去而使酶活力恢复者,称“可逆抑制剂”;反之,称“不可逆抑制剂”。在生物体内起到调节、控制代谢速率的作用。利用抑制剂作为酶的修饰剂则可获得有关活性部位结构及反应机理等信息。

RIPA裂解液（Radio Immunoprecipitation Assay Lysis buffer，放射免疫沉淀法裂解缓冲液）是一种传统的可用于裂解细胞或组织的快速裂解液，其原理为利用表面活性剂等裂解细胞膜（包括核膜），从组织或细胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常规的WB、IP、co-IP等实验。

细胞裂解成分一般使用的是表面活性剂，常用的有曲拉通X-100（Triton X-100）、脱氧胆（deoxycholate）、乙基ji苯基聚乙二醇（Nonidet P40，NP-40）、十二烷基磺酸钠（SDS）。其中Triton X-100和NP-40为非离子型，deoxycholate和SDS为离子型。不同裂解成分的裂解强度不同，一般来说Triton X-100和SDS的裂解能力较强，deoxycholate和NP-40的裂解效果较为温和，可以根据不同的实验需求选用不同的裂解液。

实验原理 溶菌酶（lysozyme）是由弗莱明在1922年发现的，它是一种有效的抗菌剂，全称为 1，4-β-N-溶菌酶，又称作粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶或胞壁质酶。活性中心为天冬氨酸52和谷氨酸35，是一种糖苷水解酶，能催化水解粘多糖的N- 乙酰氨基葡萄糖（NAG）与N-乙酰胞壁酸（NAM）间的β-1，4糖苷键，相对分子质量14700Da，由129氨基酸残基构成，由于其中含有较多碱性氨基酸残基，所以其等电点高达10.8左右，最适温度为50度，最适PH为6～7左右。在280nm的消光系数为 13.0。该酶活性可被一些金属离子Cu2 ，Fe2 ，Zn2 （10-5～10-3M）以及N-乙酰葡萄糖胺所抑制，能被Mg2 ,Ca2 （10-5～10-3M）、NaCl所激活。

在日常检测中，有的时候虽然我们的检测方法优良，仪器设备检定合格，环境条件满足检测要求，检测员技术娴熟，但是，往往得到的检测结果却不可能是绝对准确的。即使是同一个检测人员对同一个检测样品、对同一项检测项目进行多次检测，得到的结果也不会完全相同，总会产生各种不同的差别，换句话说，任何项目的检测都不可能是绝对准确的，测得值与真实值之间总是或多或少的存在着差别，即误差。

一般情况下，化学试剂的保质期为1-2年，有些性质稳定的保存期就长点，这取决于正确的保存方法。这就需要考虑存储条件是否符合说明书上的要求，例如温度、光照和湿度等，对于那些没有明确存储条件的试剂，更要注意存储条件，通常高温、暴晒和高湿度，非常容易造成产品的失效。   未开启的化学试剂，保质期到了未必就不能用。如果你之前能够记录周围环境的变化，特别是遇到一些极端的温度、湿度等环境的变换，就可以判断过期的试剂是否可以再继续使用。

实验室细胞培养中常见的生物污染包括细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑点污染、真菌污染和原生动物污染。 　　1.细菌污染 　　细菌在普通倒置显微镜下呈黑色和细砂状。根据感染菌的种类不同，可能会呈现不同的形状，培养液一般会变得浑浊、黄色，对细胞生长有明显影响。 　　2.霉菌污染 　　正常情况下，培养基在 37℃ 培养箱中培养两三天，在倒置显微镜下仍保持透明，无杂质。一旦出现絮状杂质，显微镜下可见丝状和团块状漂浮物，菌丝明显。此时，虽然细胞仍在生长，但它们的生命状态会在长时间后逐渐恶化。

血清主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。由于血清来源于动物，且含有细胞培养中所需的各种营养（血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等），这奠定了血清是细胞培养实验中最普遍的试剂的基础。

聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的 DNA 片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的 DNA 大幅增加。 我们进行核酸扩增时，经常会不定的出现一些异常问题，那么遇到这些问题该怎么解决呢？接下来跟着远慕一起来看看前辈们的经验。 没有 ct 值 检测结果遇到没有 Ct 值情况,排查是否有以下问题: 1.循环数不够 (一般不超过 45 循环，不仅背景值提高,定量也不准); 2.PCR 程序设置错误,检测荧光信号的步骤有误。一般 SG 法采用 72 ℃ 延伸时采集，TaqMan 法则一般在退火结束时或延伸时采集信号，另外荧光采集是否选中。

ATCC是美国的一个微生物菌株保藏中心。每种已经定名的细菌都会有一个模式菌株,一般就是该种最早发现的那株菌株,称为标准菌株,用来作为和其他细菌之间比较的对照物。新种鉴定的时候作为参比的实验菌株就必须是标准菌株。 　　细菌（学名：Bacteria）是指生物的主要类群之一，属于细菌域。也是所有生物中数量最多的一类，据估计，其总数约有5×10^30个。细菌的形状相当多样，主要有球状、杆状，以及螺旋状。 　　细菌也对人类活动有很大的影响。一方面，细菌是许多疾病的病原体，可以通过各种方式，如接触、消化道、呼吸道、昆虫叮咬等在正常人体间传播疾病，具有较强的传染性，对社会危害极大。

NK细胞和K细胞的不同点： 　　1、数量不同 　　K细胞占血液中淋巴细胞总数的5％～7％，NK细胞占血中淋巴细胞总数的2％～5％。 　　2。免疫杀伤方式不同 　　K细胞必须在抗体协助下才能具有免疫杀伤作用,NK细胞不需抗原激活,更不需抗体的协助,它可直接杀伤靶细胞。 　　3、细胞体积不同 　　K细胞体积略大,是中型淋巴细胞,其直径约为9～12μm。NK细胞是大淋巴细胞,平均直径为12～15μm,胞质较多,在胞质内有许多大小不等的嗜天青颗粒。

质控菌株本质上是标准菌株的商业衍生产品，其应有可靠的溯源证明追溯至其使用的标准菌株来源，在微生物实验室仅可作为工作菌株进行使用，在使用前也应进行特性和纯度的确认。质控定量菌株使用起来非常方便，基本就是用无菌水复溶带菌小球，震荡后即可或在其允许的存放条件及时间内使用。 自从2015版药典生效后，质控菌株这一标准菌株的商业衍生物慢慢热了起来，原来的微生物实验室，多数使用CMCC菌株，因此基本购买中检所的0代标准菌株制成1代标准贮备菌株然后再制成工作菌株进行使用，或购买地方所制备的2-3代商业衍生物作为工作菌株。其实在此之前已有不少外企使用质控菌株作为其微生物实验室菌株实验的基本耗材，但市场上的商品基本局限于ATCC、NCTC、NCPF等欧美国家菌种保藏中心的菌株，针对于CMCC菌株（中国医学细菌保藏管理中心）的质控菌株基本难寻踪迹。

从冻存的细胞提取RNA 1). 将冻存管从液氮或冰箱中取出； 2). 不待细胞溶解，将Trizol500ul-1ml直接放入冻存管中，此时Trizol会冻成冰状； 3). 将冻存管缓慢融化，并用加样器吹打混匀； 4). 将细胞裂解液移至Eppendorf管中，16000′g离心1min，吸出管底絮状沉淀;

准备工作 1、实验器具与材料： （1）移液枪：200ul、10ul （2）吸头：200ul、20ul （3）吸头台：放置200ul和20ul的吸头一个 （4）EP管1.5ml、100ul

pH计,酸度计主要指实验室酸度计,主要分为台式pH计|酸度计，便携式pH计|酸度计，笔式pH计|酸度计三大类别。 一、pH计|酸度计原理 用pH计|酸度计进行电位测量是测量pH最精密的方法。pH计|酸度计由三个部件构成：

实验器具与材料： 1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头：1ml、200μl、20μl 3、匀浆管：5ml 4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个

胎牛血清白蛋白（BSA），又称第五组分，是牛血清中的一种白蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为Blocking agent;在酶切反应缓冲液中加入BSA，通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附，能减轻有些酶的变性，能减轻有些不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的变性。是胎牛血清中的一种球蛋白，一般获取胎牛血清白蛋白，常常运用的方法是加热法。

牛血清白蛋白是血液中的主要成分（38g/100ml），分子量68kD，等电点4.8，含氮量16%，含糖量0.08%，仅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。牛血清蛋白溶液可以作为测量蛋白质含量的标准曲线用。