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以光合细菌培养方法为例 光合细菌培养的方法，按次序分为容器、工具的消毒，培养基的制备，接种和培养管理四个步骤。 （一）容器、工具的消毒参考、此处从略。 （二）培养基的制备 1．培养用水 如果培养的光合细菌是淡水种，菌种培养可用蒸馏水，生产培养可用消毒的自来水（或井水）配制。如果培养的光合细菌是海水种，则用天然海水配制培养基，注意在海水中加入磷元素时，不能用磷酸氢二钾，应用磷酸二氢钾，不然会产生大量沉淀。 2．灭菌和消毒菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸气灭菌锅灭菌。小型生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅或大型三角烧瓶煮沸消毒。大型生产性培养则把经沉淀砂滤后的水用漂白/粉（或漂白液）消毒后使用。

细胞培养实验室发生支原体污染的风险较高。支原体天然存在于周围空气（气溶胶形式）、人的体表（携带和隐藏）以及未彻底消毒的器物表面，而细胞培养基中由于含有血清，营养丰富，很容易导致支原体的快速繁殖。 支原体的污染肉眼不易察觉，直到严重的阶段才会出现培养基变色、细胞异常等情况。支原体可造成细胞代谢改变，基因表达谱发生变化，从而严重干扰实验进程。因此，在细胞培养过程中，定期监测是否存在支原体污染，及时预防支原体污染是每个科研人员的工作之一。

原代细胞是指从机体的组织（如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等）经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的 细胞，称为原代细胞。 一股认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细抱培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞疡变、细胞工程等问题的研究。

原理 人体很多部位与外界相通，存在栖息菌群，但不致病，当菌群失调或分离到致病菌则具有临床意义；另外机体某些部位是无菌的，如检出则视为致病菌。并排除采样及操作污染。

是细菌鉴定中最重要的一种，主要是借助细菌对营养物质分解能力的不同及其代谢产物的差异对细菌进行鉴定，包括蛋白质分解产物试验、触酶试验、糖分解产物试验、氧化酶试验、凝固酶试验等。

鸡卵泡颗粒细胞分离自鸡卵泡组织；成熟卵泡是卵巢的组织结构成分之一，卵泡腔很 大，卵丘很明显。卵泡内膜细胞紧靠卵泡颗粒层，与颗粒层细胞之间有一层基膜相隔，内 膜细胞呈多边形，胞质清亮，胞核圆形，细胞间可见许多毛细血管，外膜细胞位于最外层 ，多呈梭形，与周围结缔组织分界不明显。卵泡(follicle)中卵母细胞四周有一层菱形或扁 平细胞围绕，在卵泡开始发育、卵细胞成长的同时，周围的菱形细胞变为立方形，并由单 层增生成复层，因其细胞浆内含有颗粒，故称为颗粒细胞。初级卵泡的颗粒细胞为单层； 次级卵泡的颗粒细胞增至复层；成熟卵泡的颗粒细胞展开又变为单层。颗粒细胞的胞核大 而圆，着色深，细胞的游离面有许多细长突起伸入放射带的凹陷部。

（1） 培养箱应由专人负责管理，操作盘上的任何开关和调节旋扭一旦固定后，不要随意扭动，以免影响箱内温度，CO2、湿度的波动，同时降低机器的灵敏度。 （2） 所加入的水必须是蒸馏水或无离子水，防止矿物质储积在水箱内产生腐蚀作用。每年必须换一次水。经常检查箱内水是否够。 （3） 箱内应定期用消毒液擦洗消毒，搁板可取出清洗消毒，防止其它微生物污染，导致实验失败。

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被促卵泡素（FSH）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的促卵泡素（FSH）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被促黄体生成素（LH）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的促黄体生成素（LH）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被脱氢奎尼酸合成酶（DHQS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脱氢奎尼酸合成酶（DHQS）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被汉逊酵母宿主蛋白（HCP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的汉逊酵母宿主蛋白（HCP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被孕酮（P4）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的孕酮（P4）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被雌二醇（E2）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌二醇（E2）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被分支酸合成酶（CS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的分支酸合成酶（CS）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。

BL21是最早开发的用于原核表达的菌株，BL21（DE3）、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表达菌株均来源于BL21  菌株。该菌株主要用于非毒性蛋白的表达，不含T7 RNA聚合酶， 所以不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达(如：pET系列)；但含 有大肠杆菌RNA聚合酶，可以用于tac或tr c等使用大肠杆菌RNA  聚合酶的原核系统的表达（如：pGEX，pMAL质粒）。AngYuBio  High5TM系列 BL21感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检  测转化效率达107cfu/ μg。

细胞接收处理流程 ： 1：观察有无破损漏液情况 ，如有请拍照及时联系客服。 2：酒精消毒培养瓶表面后显微镜下观察细胞状态 ，观察拍照后不用打开培养瓶盖 放入培养箱静 止2-3小时稳定 细胞状态。 3：请按照细胞操作指南进行第一次传代冻存处理。 4：产品随货会附带细胞说明书、细胞培养操作指南、细胞鉴定、支原体检测报告。

重组质粒的鉴定。当质粒的重组或其它载体重组后，通常会发生质粒的重组失败，包括质粒的自身环化。因而要求进行筛选，把重组成功的质粒找出来。在目前常用的质粒和其它载体中含有相应的抗生素抗性基因，一旦重组成功，质粒环化（包括自身环化），抗生素抗性基因表达，被转化的大肠杆菌便具备抗相应抗生素的能力，可以含该抗生素的培养基中生长传代，不然，重组失败，大肠杆菌便不能抵抗该抗生素而死亡。

目前中国药典、消毒技术规范中用于各种化学消毒剂、干热、环氧乙/烷、高压蒸汽等灭菌效果的验证和评价的芽胞悬液的获得主要通过自制和商品化两种途径。

微生物实验室如果从事致病菌检测、培养基质控验收、方法验证等相关工作，就应该备有质控菌株。实验室需对使用的质控菌株进行规范性管理，以便有效地、安全地使用，保证实验结果的准确性，今天远慕生物为大家总结了实验室质控菌株复苏保存过程中常见的问题。