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荧光原位杂交技术（ fluorescence in situ Hybridization,FISH）是一种非放射性原位杂交方法，用特殊的荧光素标记核酸探针，在细胞或组织切片标本上进行杂交，以检测细胞内 DNA 或 RNA 特定序列存在与否。 FISH 实验操作与用非荧光标记探针的原位杂交基本相似。在组织准备方面，新鲜组织、冷冻组织样本、细胞涂片、培养细胞爬片等材料均可以用于进行FISH 实验检测。

什么叫细胞爬片? 细胞爬片就是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长，主要用于组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等. 细胞爬片经验总结： 1.爬片可用一般的盖玻片，也可用爬片； 2.应用盖玻片，可根据自己的需要剪裁成合适的大小，以备置于 6 孔板、12 孔板或 24 孔板；裁剪时可用前护士输液用于打开玻璃安瓶的小沙轮，或者是口腔科的那种小沙轮，轻轻划一下后，稍用力一掰就分开了。 如果接种大皿的话，我一般不将盖玻片切开，直接清洁后放入培养皿中，到染色时再将之切 开，这样既保证了细胞均一性，又可同时做几个指标的染色。

Product Format: a T25 flask Culture Properties：贴壁 Complete Growth Medium: 89%F12K+10%FBS+1%双抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

细胞爬片免疫荧光步骤： 1.远慕生物细胞爬片；首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗净，烤干，置于器皿中高压灭菌，然后再烤箱中大约8小时烤干备用。 爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可，我选择在培养皿中爬。一为节约经费（培养皿可以重复利用）二来觉得培养皿口大，操作比较方便。培养皿消毒同上，消毒时记得消两把镊子 具体操作是：用胰酶消化好细胞，充分吹打，使之成单细胞悬液（注意：这一点很重要，关系到将来爬出来片子的质量） 取出消毒的培养皿，可以先加少量培养基（以使玻片与培养皿紧密接触），将玻片小心放入摆放其中，然后将单细胞悬液一滴一滴的滴到玻片上。最后盖上培养皿置于37度5％CO2的暖箱中培养，根据细胞生长状况，24小时或更长时间适时取出爬片。

大肠杆菌作为外源基因表达的宿主,遗传背景清楚,技术操作简单,培养条件简单,大规模发酵经济,倍受遗传工程专家的重视.目前大肠杆菌是应用最广泛,最成功的表达体系,常做高效表达的首/选体系 真核基因在大肠杆菌中表达,必须有合适的表达载体(Vector),常用载体:pBV220,pET系统

DH5a菌株 　　DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。 　　基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1

平板划线分离法 由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。

提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理：CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

植物检测试剂盒原理、使用方法： 植物检测试剂盒使试样中各组分电离生成不同荷质比的离子，经加速电场的效果，形成离子束，进入质量剖析器，利用电场和磁场使发作相反的速度色散——离子束中速度较慢的离子通过电场后偏转大，速度快的偏转小； 在磁场中离子发作角速度矢量相反的偏转，即速度慢的离子仍然偏转大，速度快的偏转小；当两个场的偏转效果互相补偿时，它们的轨迹便相交于一点。与此同时，在磁场中还能发作质量的别离，这样就使具有同一质荷比而速度不同的离子聚集在同一点上，不同质荷比的离子聚集在不同的点上，将它们分别聚集而得到质谱图，然后确认其质量。

印迹法(blotting)即转移电泳，是20世纪70年代发展起来的一种新方法。Southern于1975年建立了检测特异DNA片段的DNA- RNA杂交法，称作Southern印迹法。1977年Alwine等把此方法应用到RNA的研究方面，称作Nouthern印迹法。1979年Towbin等则把该方法扩展应用到蛋白质分析方面，称作Western印迹法。1982年 Reinhart报道的双向蛋白质印迹法，称作Eastern印迹法。目前，有人把Southern，Nouthern，Western印迹法分别称作DNA印迹法，RNA印迹法和蛋白质印迹法。而每一种印迹法又可以分为斑点印迹法和电泳转移印迹法。前者是将样品直接吸附于固相载体上，而后者则是将样品先经过电泳后在转移到固相载体表面上，其余操作基本相同。由于核酸和蛋白质等大分子物质印迹到固相载体，容易和各种探针发生化学或免疫反应，因而对检测样品(尤其是粗样品)中某些组分的理化性质是有益的。其操作过程所需的试剂量少，灵敏度高，所以应用较为普遍。

随着蛋白类生物制品的发展，蛋白质纯度已经成为药品管理的重大问题。在生物制品的质量指导原则中指出：除了评价原料药和药物产品的纯度，可能由预期产品和多种产品相关物质组成之外，还应评价可能出现的杂质成份。这些杂质可能是在生产过程中产生的或者是与产品相关，它们的结构可能是已知的、定性的，亦或是未知的。

BCA法测蛋白浓度时,样品不溶解时按照以下方法解决操作。 　　BCA 蛋白定量法是一种快速灵敏、稳定可靠的蛋白定量测定方法，其测定范围是10－2000ug/ml，是比Lowry 法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。 　　BCA 蛋白定量测定方法：（96孔板） 　　1、配制BCA 工作液: 根据标准品和样品数量，按50 体积试剂A，1 体积试剂B 配制适量BCA 工作液，充分混匀。 　　2、将蛋白标准品按0, 1, 2, 4, 6，8, 10 微升加到96 孔板的蛋白标准品孔中，加灭菌双蒸水补足到10 微升；取10 微升待测样品加入96 孔板。每个测定要做2-3 个平行。

滴定误差要求：以不确定度表示，≤ ± 0.2% 。 　　滴定误差分类：主要包括称量误差、量器误差、方法误差。 　　（1） 称量误差 　　每次称量误差：± 0.0001g，一份试样称量误差±0.0002g。 　　若相对误差 ±0.1%，则每一份试样的称量至少为0.2g。

我国将标准物质分为一级与二级，它们都符合“有证标准物质”的定义。 　　（1） 一级标准物质 　　一级标准物质是用绝对测量法或两种以上不同原理的准确可靠的方法定值，若只有一种定值方法可采取多个实验室合作定值。它的不确定度具有国内最高水平，均匀性良好，在不确定度范围之内，并且稳定性在一年以上，具有符合标准物质技术规范要求的包装形式。一级标准物质由国务院计量行政部门批准、颁布并授权生产，它的代号是以国/家级标准物质的汉语拼音中“Guo”“Biao”“Wu”三个字的字头“GBW”表示。

滴定的操作方法 进行滴定时，应将滴定管垂直地夹在滴定管架上。 如使用的是酸管，左手无名指和小手指向手心弯曲，轻轻地贴着出口管，用其余三指控制活塞的转动。但应注意不要向外拉活塞以免推出活塞造成漏水；也不要过分往里扣，以免造成活塞转动困难，不能操作自如。 如使用的是碱管，左手无名指及小手指夹住出口管，拇指与食指在玻璃珠所在部位往一旁（左右均可）捏乳胶管，使溶液从玻璃珠旁空隙处流出。注意：①不要用力捏玻璃珠，也不能使玻璃珠上下移动；②不要捏到玻璃珠下部的乳胶管；③停止滴定时，应先松开拇指和食指，最后再松开无名指和小指。

影响酸碱中和滴定结果的因素： 　　1、读数：滴定前俯视或滴定后仰视 （偏大）滴定前仰视或滴定后俯视（偏小） 　　2、未用标准液润洗滴定管 （偏大）；未用待测溶液润洗滴定管（偏小） 　　3、用待测液润洗锥形瓶 （偏大） 　　4、滴定前标准液滴定管尖嘴有气泡，滴定后尖嘴气泡消失 （偏大） 　　5、不小心将标准液滴在锥形瓶的外面 （偏大）

在实际中，影响酸碱指示剂变色范围的因素主要有两方面：一种是影响指示剂常数KHln的因素，包括温度、溶剂、溶液的离子强度等，其中温度的影响较大。另一种是影响变色范围宽度的因素，如指示剂用量、滴定程序等，现具体讨论如下。

有许多植物色素在不同pH值的溶液里会呈现出不同的颜色。因此，每个地方都可以就地取材，自制一些酸碱指示剂。下面远慕生物介绍一些自制的方法： 1.从红萝卜皮中提取酸碱指示剂：刮下红萝卜的红皮后，用95%的酒精浸泡一天左右，过滤取出它的滤液即酸碱指示剂。按检验的需要制作pH1～14的标准液若干个，每个标准液取10ml分置于试管中，再分别加入红萝卜皮浸泡液10滴，塞紧作为比色样品。在某待测溶液中加入红萝卜浸泡液，颜色发生变化后再与比色样品比较，就能确定待测溶液pH值的大致范围。 2. 从紫草中提取酸碱指示剂：取紫草5g，用50%的酒精浸泡一天可得到紫草素的紫色的酒精溶液即酸碱指示剂。其遇到酸碱的变色与石蕊试液相同。

不同动物细胞融合的特点和诱导因素 1、病毒诱导融合 病毒是最早采用的融合剂。常用于诱导动物细胞融合的病毒有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等，其中仙台病毒最常用。用作融合剂的病毒必须事先用紫外线或β-丙内酯灭活，使病毒的感染活性丧失而保留病毒的融合活性。 优点：融合率较高，对各种动物细胞都适宜，且仙台病毒能在鸡胚中大量繁殖，容易培养； 缺点：仙台病毒不稳定，在保存过程中融合活性会降低，并且制备过程比较烦琐。此外，病毒引进细胞后，可能会对细胞的生命活动产生干扰。

随着生命科学的迅速发展，细胞工程愈来愈受到人们的重视。以昆虫细胞为对象的细胞培养技术在现代实验生物学上具有重要的价值,已经广泛地应用于医学、农业及生物学的各个领域。昆虫细胞是农业生物应用方面的高新技术，主要是提取来自昆虫的一类真核细胞。通过培养制造宿主的病毒，这些病毒可以引起昆虫流行病，但对人畜和植物无害，因而可作病毒杀虫剂。还可以生产某些药用蛋白。许多昆虫培养基配方正不断得到改进,以使之适于细胞生长。zui通用的商品培养基有Grace氏培养基、TC-100、IPL-41、TNM-FH以及经改良的哺乳动物细胞培养基TC199-MK等。