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转染效率低 影响转染效率因素很多，主要因素有细胞培养物、血清、载体构建、DNA质量以及转染技术等。 1.没有使用优化条件：优化阳离子脂质体试剂和DNA的量。 2.DNA-阳离子脂质体试剂复合物在存在血清条件下形成。 3.存在抑制剂：不要在用于制备DNA-阳离子脂质体复合物的培养基中使用抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素。透明质酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。

大多数原代贴壁细胞贴壁时间是6h到12h，细胞不贴壁有好多种原因的： 1、如果你用玻璃培养瓶培养的话，有可能你的瓶子没处理好；建议你用一次性培养瓶，进口的都可以。 2、一般做原代细胞贴壁培养用胰酶消化，消化的程度要掌握好，如果消化时间不到、分散不均匀不贴壁。一般消化有热消化，就是放在37度里消化，时间比较短不好控制，传代培养常用。还有就是冷消化放在4度里，一般在几个小时以上，胰酶浓度也有要求的，一般都用0.125－0.25％之间。ph在7.6左右。 3、还有就是天然培养基的选择，就是血清种类，血清能够使细胞贴壁，并且提供细胞生长的重要营养成分。

一、可利用交叉实验即可辨别ELISA试剂盒是否造假，方法如下： 　　1.取出购买的试剂盒A的包被板两条； 　　2.一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线； 　　3.另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线； 　　4.后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物； 　　5.实验完毕后，检测两条标准曲线，如果两条标准曲线一致则说明两个ELISA试剂盒检测的同一个指标而非A和B，即该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。

elisa试剂盒试验原理： 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

实验室常用小型设备包括：天平、水分测定仪、超纯水机、PH计、电导率仪等，相比大型分析仪器，小型设备对环境条件要求相对少，但对于它们的维护保养却同样值得重视，以电子天平为例，无论是使用、维护、保养都应该谨慎对待，否则，称量稍有误差，就会导致后续的一系列分析数据失去参考价值。本文远慕主要针对电子天平、PH计(酸度计)、紫外可见分光光度计、电导率仪等小型仪器的维护、使用、及保养原则予以整理介绍。

试剂规格基本上按纯度(杂质含量的多少)划分，共有高纯试剂、光谱纯试剂、基准试剂、分光纯试剂、优级纯试剂、分析试剂和化学纯试剂等7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要优级纯、分级纯和化学纯3种。选用不同纯度试剂的标准主要是不同的反应需求，以及该试剂所含杂质对分析要求有无影响。

亚甲基蓝的基本信息 亚甲基蓝，化学式为C16H18N3ClS，是一种吩噻嗪盐，为深绿色青铜光泽结晶或粉末，可溶于水和乙醇，不溶于醚类。亚甲基蓝在空气中较稳定，其水溶液呈碱性，有毒。亚甲基蓝广泛应用于化学指示剂、染料、生物染色剂和药物等方面。

为了做实验，细胞铺匀是常见的一种。然而，有许多人不是很成功，分布也不均匀:要么中间密集，周围稀疏，要么周围密集，中间秃顶。以下是利用96孔板把细胞铺匀，希望对大家有用!

肥大细胞(Mast cell)是疏松结缔组织内常见的细胞，常成群的沿着小血管和淋巴管分布，也常见于支气管和胰腺的小叶间导管周围，一般细胞较大，直径约为20-30μm，呈圆形或椭圆形，胞核较小、胞质内充满粗大且具有异染性嗜酸性颗粒。 甲/苯胺蓝(Toluidine Blue O)中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲/苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。肥大细胞颗粒呈紫红色，其他呈蓝色。

瑞氏染色法：染色方法和注意事项 （1）血涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。 （2）冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，以防染料沉着在血涂片上。冲洗时间不能过久，以防脱色。如血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗。 （3）染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。 （4）瑞氏染色Ⅰ液由瑞氏染料、甲醇（AR级以上）和甘油组成，Ⅱ液为磷酸盐缓冲液（pH6.4～pH6.8）。

耐热 DNA 聚合酶多应用在 PCR 技术中。各种耐热 DNA 聚合酶均具有 5'-3' 聚合酶活性，但不一定具有 3'-5' 和 5'-3' 的外切酶活性。3'-5' 外切酶活性可以消除 错配，切 平末端；5'-3' 外切酶活性可以消除合成障碍。由于上述这些不同，可以将耐热 DNA 聚合酶分为三类，下面远慕生物简单介绍一下。

细菌在液体培养基中的生长现象有三种：混浊生长、沉淀生长、菌膜生长（表面生长）1、混浊生长：大多数细菌在液体培养基中生长繁殖后均匀浑浊。如大肠埃希菌、志贺菌等。2、沉淀生长：少数链状排列的细菌如链球菌，炭疽芽/孢杆菌等则呈沉淀生长。3、菌膜生长（表面生长）：枯草芽孢杆菌、结核分歧杆菌和铜绿假单胞菌等专性需氧菌一般呈表面生长，常形成菌膜。

Product Format: one storage tubeCulture Properties：贴壁Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%双抗Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%Application: Cells and cancer researchNOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

背景简介 Escherichia coli (T . Escherich 1885) E .coli 是革兰氏阴性菌，是 1885 年 Dr .Theodor Escherich 首次命名的。E .coli 主要在动物肠道中存在，有一些自然存在大 肠杆菌菌株对人类是致命的。现在大多数常用的商业化大肠杆菌都来自于两种分离株 K- 12 和 B 菌株。K- 12 菌株是 1920 年从一个患者身上分离的，现在由此衍生出实验室菌株 MG1655 、DH5 和 DH10b (也称为 TOP10)。 B 菌株的历史较为复 杂，可能是 1918 年发现的，但是是在 1942 年命名的，BL21 及其衍生物是 B 菌株中最常见菌株。 检测原理 本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。试剂盒中的酶标板已预先包被抗体。采用生物素-抗体作为检测抗体。将标准品、 待测样品加入孔中,孵育后洗去未结合的成分。再加入生物素-检测抗体，生物素-检测抗体与已经结合在包被抗体上的抗原 相结合。洗去未结合的成分后，加入 HRP-链霉亲和素(SABC)。再洗去未结合的成分，加入 TMB 显色底物，TMB 在辣根过 氧化物酶(HRP)的催化下呈现蓝色，加反应终止液后变成黄色。用酶标仪在 450 nm 波长测 OD 值。目的抗原浓度与 OD450 值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算样品中目的抗原的浓度。

可用于胶原蛋白的纯化方法包括盐析法、透析法、离心法、电泳法和色谱法，其中盐析法、离心法和电泳法最为常用。由于单一方法难以完全分离纯化胶原蛋白，实际操作都是通过复合法来达到分离纯化胶原蛋白的目的。 盐析法一般采用高浓度NaCl； 离心法常选用制备型低温超速离心机； 电泳法多采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE），该法既可用于胶原蛋白的分离纯化，还可用来测定胶原蛋白分子的相对分子质量。

Ⅰ型胶原的原纤维平行排列成较粗大的束，成为光镜下可见的胶原纤维，抗张强度超过钢筋。其三股螺旋由二条α1（Ⅰ）链及一条α2（Ⅰ）链构成。每条α链约含1050个氨基酸残基，由重复的Gly-X-Y序列构成。X常为Pro（脯氨酸），Y常为羟脯氨酸或羟赖氨酸残基。重复的Gly-X-Y序列使α链卷曲为左手螺旋，每圈含3个氨基酸残基。三股这样的螺旋再相互盘绕成右手超螺旋，即原胶原。

水解影响因素与机制 　　多肽合成药物在不同的环境中可以被酸、碱、蛋白酶催化或被金属离子催化水解。例如，在25℃的温度下，二肽甘氨酰甘氨酸在1 mol /LNaOH中水解的半衰期约为2天，在1 mol /L盐酸中水解的半衰期则为150天。而难活化的肽键在钯和铜配合物的催化下能迅速裂解。过去非催化肽键水解并未得到较多关注，直到1988年Kahne和Still用C标记了甘氨酸并使其结合在肽C－末端，在中性pH值范围内和25℃的温度下能监测到释放少量的甘氨酸，它的水解速率为3 ×10－ 9s－ 1，从而推算得出它的半衰期为7年。

多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）：用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个B细胞克隆，产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物，即多克隆抗体。单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。

琼脂：是植物胶的一种，常用海产的麒麟菜、石花菜、江蓠等制成，为无色、无固定形状的固体，溶于热水。 琼脂糖：琼脂糖：是线性的多聚物，基本结构是1，3连结的β-D-半乳糖和1，4连结的3，6-内醚-L-半乳糖交替连接起来的长链。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。

化学反应的速度随温度增高而加快，但酶是蛋白质，可随温度的升高而变性。在温度较低时，前一影响较大，反应速度随温度升高而加快。但温度超过一定范围后，酶受热变性的因素占优势，反应速度反而随温度上升而减慢。常将酶促反应速度最大的某一温度范围，称为酶的最适温度。