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有害微生物污染 因环境条件变化打破了正常的生态平衡体系,抑制一些微生物生长而促进另一些微生物旺长,形成了不同于正常微生物群落结构的有害微生物群落,改变原来的生态功能,造成了环境质量的恶化,直接或间接地影响其他生物的生存。与另外两种类型的微生物污染相比,这类微生物污染的毒性作用范围更广, 后果更为严重。有害微生物群落的物种构成可能包括细菌、真菌、藻类、原生动物等各种微生物,不仅包括了有害微生物种类,甚至包括了一些正常条件下的有益微生物种类。 从此可知,对于生态毒理学来说,凡是对生态系统有害的微生物及其群落均为有害微生物。因此,这类微生物群落的种群并不是确定的,而会随环境条件的变化而改变。

我们在日常的实验工作中是不是经常会遇到这样或者那样的小问题比如：硫酸溅出来、不小心着火了、瓶塞打不开、仪器上的油污除不去等等，今天就教你几个实验小技巧，让你的实验事半功倍！

益生菌产品都是以菌株为主，一些益生菌产品选用一种菌株，而更多益生菌产品则会添加几种菌株混合，以叠加产品功效。 　　益生菌菌株，多来自动物体内，如两歧双岐杆菌、鼠李糖杆菌，瑞士乳杆菌、植物乳杆菌等等。 　　两歧双歧杆菌，是人体自出生就产生的，具有较高稳定性，有助提高钙铁磷的利用率，舒缓腹泻便秘，抑制有害菌生长，增强免疫力，双岐杆菌会随着年龄的衰老逐渐减少，所以不同年龄阶段需要补充适当的益生菌。 　　鼠李糖杆菌，主要存在于人体或动物肠道内，安全性非常高，很容易被人体吸收、代谢，能够很好的增强免疫力，防止呼吸道感染，预防腹泻、便秘、过敏等等机体不适症状 。

蛋白质的制备是一项十分细致的工作。涉及物理学、化学和生物学的知识很广。高分子蛋白质具有一定的立体构象，相当不稳定，极易变性、变构，为得到天然状态的蛋白质，尽量采用温和的手段，如中性、低温、避免起泡等，还要注意防腐。

蛋白质沉淀 　　原因：加入高浓度的中性盐、加入有机溶剂、加入重金属、加入生物碱或酸类、热变性 　　少量的盐（如硫酸铵、硫酸钠等）能促进蛋白质的溶解。如果向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出，这种作用叫做盐析． 　　这样盐析出的蛋白质仍旧可以溶解在水中，而不影响原来蛋白质的性质，因此盐析是个可逆过程．利用这个性质，采用分段盐析方法可以分离提纯蛋白质．

一级结构是蛋白质分子中氨基酸以肽键连接的顺序，每一种蛋白质分子，都有其特定的氨基酸组成和排列方式，由此就决定了不同的空间结构和功能。蛋白质分子中一级结构关键部位氨基酸的改变，会直接影响其功能，这个关键部位就是蛋白质分子的活性中心。已发现并确认了不下30种类型的胶原蛋白。

1.因为WB的一抗识别的蛋白质的表位是顺序表位，不是空间表位，所以WB状态下的抗原-抗体识别，与非变性的生理条件下的抗原-抗体识别不同。 2.WB之前，先用分子筛纯化同时也是检测一下目的蛋白产物是否成功。也就是目的蛋白是否成功表达了，而且在提取后稳定存在了。

实验概要 免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)的含量代表着机体体液免疫的水平，并进一步代表着B细胞的功能，因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。本实验对禽血清IgG和IgA进行了分离纯化。 实验原理 免疫球蛋白包括IgG、IgM、IgA、IgE和IgD。随着免疫学的发展和需要，免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多，有单一法，但大多数采用二步法以上相结合的方法，特别是以硫酸铵提纯为基础，再经过层析柱的方法来提高免疫球蛋白及其各成分的纯度最为常用。

琼脂糖凝胶的特点 天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80％）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下。 （1）琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。 （2）琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大（约占98％~99％），近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。 （3）琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。 （4）电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。 目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，由于建立了超微量技术，0.1ug蛋白质就可检出。 琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。

污染原因 1、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 2、PCR试剂的污染：主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

PCR反应的准备 PCR反应体系 10×扩增缓冲液 10μl 4种dNTP混合物（终浓度） 各100～250μmol/L 引物（终浓度） 各5～20μmol/L 模板DNA 0.1～2μg Taq DNA聚合酶 5～10 U Mg2+（终浓度） 1～3mmol/L 补加双蒸水 100 μl dNTP、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶以及Mg2+的加量（或浓度）可根据实验调整，以上表格只提供大致参考值。 PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。 引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。

Flag标签蛋白检测抗体 　　远慕生物提供可用于WB，IF，IP应用的Flag抗体，特异性检测Flag标签融合蛋白，Flag标签抗体可识别在细胞内表达的Flag标记重组蛋白，包括Flag位于氨基末端、中段以及羧基末端的重组蛋白。 　　Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽（ DYKDDDDK）融合到目标蛋白。Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，该系统已广泛应用于细菌、酵母和哺乳动物细胞等多种细胞类型，相应的Flag标签抗体也被广泛应用。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。Flag标签可以通过加入肠激酶处理去除，肠激酶专一识别该肽序列C末端的5个氨基酸残基。Flag抗体可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白等。 　　由于Flag标签蛋白检测抗体亲水特性，Flag标签往往位于融合蛋白的表面上，因此比较容易被抗体接近并识别。不同的Flag标签抗体与Flag标签 有不同的识别和结合特性。

菌落总数 食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），所得1mL （或1g）检样中形成菌落的总数。 按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在 平板计数 琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。

蛋白质免疫印迹杂交实验（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻译指导蛋白质合成量分析检测手段中经典和广泛为业界认可的一种,也是论文中常见的数据呈现形式之一。虽然Western Blot实验原理比较简单，但是实验耗时长、步骤繁琐和实验结果重复性差，导致刚进实验室的小伙伴们，实验做的焦头烂额。

WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法，然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做！这是因为处于不同的细胞生长状况和 / 或特定的细胞周期时，磷酸化蛋白可能仅占细胞总蛋白中的一小部分，处理不得当时，还会快速的去磷酸化。 磷酸化蛋白质 WB 做不好的原因有许多，比如封闭问题，抗体问题，或所需的磷酸化蛋白可能不存在于样品中或者低于 WB 检测的量。然而，有一个常被大家忽视的重要原因就是蛋白样品制备所用的方法是否适合于磷酸化蛋白的提取？

器材与试剂： 干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。 具体步骤： （1）水的制备： 细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.

活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。

红细胞裂解液是一种去除红细胞最简便易行的方法，即用裂解液裂解红细胞，它 既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞。裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除 方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化，淋巴细胞的分离纯化以及组织细 胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不 含红细胞，可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和 提取等。

可见分光光度法的基本原理利用的是朗伯—比耳定律。 布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度成正比：A∝b 。 1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有成正比的关系：A∝ c 。 二者的结合称为朗伯—比耳定律：当一束平行的单色光通过均匀、非散射的稀溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。

核糖核酸（RNA）含磷量约为9.5%，脱氧核糖核酸（DNA）含磷量约为9.2%，采用定磷法可准确测出磷含量，进而折算出样品中核酸含量。 　　原理：在酸性条件下，定磷试剂中的钼酸铵以钼酸形式与样品中的磷酸反应生成磷钼酸，当还原剂存在时磷钼酸立即转变为蓝色的还原产物——钼蓝；钼蓝最大的刚吸收在650-660nm波长处，根据吸光值制作标准曲线，从而确定核酸的浓度。测定范围在1-10μg 　　优缺点：简单、快速；但易受蛋白与核苷酸的影响。