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1.细胞生长缓慢，易污染，培养需用抗生素 2.细胞大，无细胞壁，机械强度低，环境适应性差 3.需氧少，不耐受强力通风与搅拌 4.群体生长效应，贴壁生长（锚地依赖性） 5.培养过程产品分布细胞内外，成本高 6.原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡

核酸检测具体流程如下： 1. 核酸提取 使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。

组织脱水、透明和浸蜡 在脱水过程中，所用各级酒精的纯度应尽量保持，以便将组织内的水分彻底脱去。在无水/酒精中的时间不宜过长，以防组织过硬，造成切片不顺畅。如果无水/酒精中含有水分，则组织脱水不彻底。这种含有水分的组织二甲/苯不能完全浸入，造成切片无法透明而呈现混浊现象。此时可将组织重行在新无水/酒精中脱水。透明所用二甲/苯应保持纯度，否则透明难以充分，不利于石蜡渗透。组织在二甲/苯中的时间需要严格掌握，时间过长则组织脆硬易碎，时间过短石蜡不易浸入。因为透明所需时间较短，所以透明时间必须注意。浸蜡的温度不可以过高，一般应调节在54～56℃。温度过高时会使组织变脆。浸蜡时间应适当严格控制。

农杆菌LBA4404感受态的制作和转化的具体步骤1.农杆菌感受态细胞制备：（1）祧取单菌落接种于5ml含rif的YEB液体培养基中，28度，160-250r/min振荡培养过夜。（2）取2ml菌液转入50mlYEB液体培养基中，继续培养至OD值为0.3-0.4。（3）转入无菌离心管，冰浴30min。（4）5000r/min离心5min，去上清。（5）加入2ml20mmol/LCaCl2重悬菌液，离心，去上清。

原代细胞因它更接近于体内细胞的新陈代谢，逐日成为科研学者青睐的研究工具，但是原代细胞是出了名的难培养，需要耗费大量的时间、成本和资源。此外还存在生长缓慢和传代有限的问题。    细胞系因容易培养且产量可观而成为研究首选。然而，它们并不完美，细胞系会不断发生突变，连续传代导致它们的基因型和表型发生变化。而且，还存在着鉴定错误和交叉污染的问题，让它们变得不那么可靠。    那么是否有什么方法可以解决原代细胞在有限代数的增殖后就衰老、死亡的问题呢？答案是必然的。通过细胞永生化的技术，能让这些原代细胞脱离正常衰老死亡的过程，并且获得持续分裂的能力。

“细胞株”和“细胞系”是动物细胞工程中常用的两个名词，但由于概念不清，使用混乱，容易带来不必要的困惑。本文拟就这两个名词的历史渊源和现实应用进行讨论。

1、问：怀疑购买的Gibco胚胎干细胞专用胎牛血清（Gibco ES专用胎牛血清）染菌，想用滤膜过滤一下，可否自己用0.22μm滤膜过滤？对血清性质有多大影响？有做过的么？ 　　答：可以过滤的，血清当出厂时都是0.22μm或0.1μm过滤除菌。想证明有没有染菌不用过滤这么麻烦，只要放置于37℃过夜就可以了，如果有微生物污染会变浑浊的，如果还是澄清的就说明没有问题的。实验室中血清很难直接过滤，一般要加到培养基中再过滤。我们实验室制备培养基时，都使用滤膜过滤，一般而言如果制备1-2瓶培养基，一个滤膜及一支30ml注射器可以过滤50ml小牛血清。如果大量制备培养基也可以将血清加到培养基中，使用0.22微米的大滤膜一起过滤。

一、保证采样器具的无菌性 1.玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌，保证恒温、时间足够（但不可时间过长，导致玻璃器皿易裂纹而报废）。 2.取样筐：使用前要用 75%酒精进行喷洒消毒 3.取样勺、浓奶取样提子：要保证其清洁消毒，清洁后用 75%酒精进行擦拭消毒。 4.取样袋：可现用酒精进行擦拭消毒，再在超净台用紫外灯照射消毒，（包装车间要在传递窗用紫外灯照射消毒）。 5.电子称表面用 75%酒精消毒。

　用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。 　　免疫组化和elisa所用到的原理 大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。

western blot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量 不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样，比如15%的分离胶更适合45kDa的分目的蛋白，而10%的分离胶更适合70kDa的目的蛋白而因为western blot的膜应该是完全覆盖SDS PAGE的凝胶，所以不用太担心条带在凝胶上位置偏上活偏下 所以western blot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量

Catalogue No.: FY-FN3196 Product Format: one storage tube Culture Properties：贴壁 Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%双抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Catalogue No.: FY-XM135 Product Format: one storage tube Culture Properties：贴壁 Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%双抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Catalogue No.: FY-22FN1921 Product Format: one storage tube Culture Properties：贴壁 Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%双抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Catalogue No.: FY-22FN1995 Product Format: one storage tube Culture Properties：贴壁 Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%双抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

3T6-Swiss albino 小鼠胚胎成纤维细胞 Catalogue No.: FY-22FN1462 Product Format: one storage tube Culture Properties：贴壁 Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

3T3-L1 小鼠胚胎成纤维细胞 Catalogue No.: FY-22FN1461 Product Format: one storage tube Culture Properties：贴壁 Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

3T3-J2 小鼠胚胎成纤维细胞 Catalogue No.: C815 Product Format: one storage tube Culture Properties：贴壁 Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

3T3-F442A 小鼠脂肪前体细胞 Catalogue No.: FY-22FN1663 Product Format: one storage tube Culture Properties：贴壁 Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

胎牛血清是细胞成长的快乐口粮，而进口胎牛血清被公认为品质最佳，自然是实验室里的“香饽饽”。但你知道吗？进口胎牛血清使用安全不仅关乎到实验室、实验人员安全，也上升到国家生物安全层面。你手里的进口胎牛血清够安全吗？

稳转株是指通过基因工程手段获得稳定过表达或抑制特定基因的细胞株。一般将目的基因序列或抑制目的基因的shRNA序列装载至重组载体中，再通过慢病毒系统或转座子系统将目的序列整合至宿主细胞的染色体中，实现目的基因持续、稳定的调控。 通过慢病毒系统或转座子系统转染并经过药物筛选获得的阳性细胞是一个混合细胞池，即多克隆细胞系。单克隆细胞系则是从多克隆细胞系中分选得到的，由单一细胞扩增得到的细胞株。稳转株细胞系是科研工作者常用的基因调控细胞模型，常规的科研实验，多克隆细胞系是可以满足需求的，但某些应用场景需要稳转株单克隆化。与大家一起回顾稳转株与其单克隆化的应用要点。