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AGL1菌株为农杆菌C58, RecA型背景(Lazoet al.,1991)，核基因中含有利福平抗性基因(Rif)和羧苄青霉素抗性基因(Carb)。此菌株还携带一种自身转运功能丧失的质粒(disarmed Ti plasmid)，AGL1菌株含有琥珀碱型Ti质粒pAGL0(pTiBo542DT-DNA)，该质粒含有vir基因（vir基因是TDNA插入植物基因组所必需的元件，pAGL0(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可辅助植物双元表达载体的T-DNA的转移）。pAGL0(pTiBo542DT-DNA)质粒还含有Str抗性基因，赋予AGL1菌株链霉素抗性。AGL1农杆菌适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。AGL1 电转感受态特别适用大质粒的转化，经pCAMBIA2301 质粒检测转化效率大于105 cfu/μg DNA。

为什么DH5α生长速度慢/长斑小？ 原因： （1）DH5α感受态细胞生长速度较慢； （2）涂板菌液太多，菌落过多，导致菌落生长速度慢/菌落小。 方案： （1）延长菌的生长时间； （2）建议减少菌液涂布量，剩下的菌液可放4℃保存，看菌的生长状况再决定去留。

区别于拓扑克隆、TA克隆和T4连接等常规克隆方法，无缝克隆技术可在重组酶的作用下，只需一步反应，便可将片段克 隆到任何载体中的任意位置，得到重组质粒。无缝克隆技术作为 一种非常强大的克隆技术，具有快速、简便、高效、多片段 组装和定向克隆等特点，用于单个DNA片段的克隆，多个DNA片段组装克隆以及多位点突变构建等实验。(1)单一片段的拼接克隆的引物设计引物序列包括5’端15-25nt的用于同源重组的重叠区域和3’端的目的基因的特异性引物组成。(2)多个片段的组装克隆的引物设计载体两端引物设计方法同单一片段引物设计方法，多片段引物设计参照重叠延伸PCR引物设计原则。

免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)与相应抗体（或抗原）以化学的方法结合，将荧光标记抗体（或抗原）与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体- 抗原复合物，用荧光显微镜观察。在镜下见到有荧光存在即推断有抗原抗体复合物的存在，根据已知的抗体（或抗原）即可推知另一个未知抗原（或抗体）的存在。

“单细胞测序”可以说是这几年的一个热门词汇，越来越多的研究者在自己的研究中用到这项技术，大家都知道目前单细胞测序不管是哪个平台，基本还是需要新鲜的活体组织样本，这对于很多研究者来说是难以做到的，虽然目前也有单细胞核测序技术来解决新鲜组织难以获取，或者是一些特殊组织样本难以用活细胞上机的困境，但是很多老师还是担心：冷冻样本会不会不适合单细胞测序呢？冷冻样本获得的数据质量会不会不如新鲜样本呢？

什么是引物？ 引物（primer），是一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链，在引物的3′-OH上，核苷酸以二酯链形式进行合成，因此引物的3′-OH，必须是游离的。 如何溶解引物？ 干燥后的引物质地非常疏松，开盖前最好瞬时离心一下，或管垂直向上在桌面上敲敲，将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或TE(pH8.0)缓冲液，室温放置几分钟，振荡助溶，离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水，因为有些蒸馏水的pH值比较低（pH4-5）,引物在这种条件下不稳定。

ELISA取样及运输注意事项 一、血清提取方法： 1.全血促凝管取血，轻轻颠倒两三次，放置片刻让全血凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。 2.全血普通EP管取血，室温放置2h左右，让其凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。 特别注意：取血清避免震荡，以防止溶血，溶血会对结果有影响。

1、全血 储存温度：2℃～6℃。 保存期：含ACD-B、CPD血液保存液的全血保存期为21d；含CPDA-1（含腺嘌呤）血液保存液的全血保存期35d。使用其他血液保存液时，按其说明书规定的保存期执行。 2、去白细胞全血 储存温度：2℃～6℃。 保存期：同1 去白细胞全血应在血液采集后48h内去除白细胞。

提取RNA时如何去除DNA的污染的方法： 注意实验室的标准化问题，注意污染的存在，同时严格按照说明书上的操作应该没有问题。发现DNA污染，用DNAse I 消化1小时，37度离心取上清的时候，一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体。直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,离心后的上清液就不含有DNA了。

转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA （质粒和线性双链DNA ），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。

一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM )。培养基的成分包括营养物质(氨基酸，葡萄糖)，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物质，如HEPES，当暴露于光照下就会分解产生细胞毒性物质。 酚红试剂可保护细胞免受一些HEPES降解所产生的毒性效应，但在使用未加酚红试剂的培养基的应用场合下，如荧光素酶的测定，细胞毒性则仍然是一个问题。

胰酶使用注意： 　　1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。 　　2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。

蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100×) (Protease inhibitor cocktail for mammalian cell and tissue extracts, 100×) 是一种用于哺乳动物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物(100mMAEBSF, 80μM Aprotinin,5mMBestatin,1.5mME64,2mMLeupeptin and1mMPepstatin A in DMSO)，并提供独立包装的0.5MEDTA。 哺乳动物细胞或组织提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。

酶抑制剂是一种分子结合于酶并降低它的活性。通过与酶的活性位点结合，抑制剂降低了底物与酶的相容性，从而抑制了酶-底物复合物的形成，阻止了反应的催化作用，并减少了（有时为零）反应。可以说，随着酶抑制剂浓度的增加，酶活性的速率降低，因此，产物的产生量与抑制剂分子的浓度成反比。由于阻断酶的活性可以杀死病原体或纠正代谢失衡，许多药物是酶抑制剂。 它们还用于杀虫剂中。并非所有与酶结合的分子都是抑制剂。酶激活剂与酶结合并增加其酶促活性，而酶底物在酶的正常催化循环中结合并转化为产物。 抑制剂的结合可以阻止底物进入酶的活性位点和/或阻止酶催化其反应。抑制剂结合是可逆的或不可逆的。不可逆抑制剂通常会与酶反应并进行化学改变（例如，通过共价键形成）。这些抑制剂修饰了酶促活性所需的关键氨基酸残基。相反，可逆抑制剂非共价结合，并且取决于这些抑制剂是否结合酶，酶-底物复合物或两者结合而产生不同类型的抑制。

细胞培养基（cell culture medium）是人工模拟动物细胞的体内生长环境，维持体外细胞存活和增殖的营养物质基础，其主要功能是为细胞提供适宜的pH和渗透压，以及细胞本身不能合成的各种营养物质。本文将对细胞培养基的种类、成分及理化性质，以及相关问题等方面进行介绍。

你知道培养基的凝固物质有哪些吗？ 　　最常用的凝固物质为琼脂，特殊情况下也可用明胶、卵白蛋白、血清等。 　　抑制剂和指示剂：用于选择、鉴定及判断结果。 　　1.抑制剂：必须具有选择抑制作用。目的在于抑制非检出菌（非目的菌）的生长，以利于检出菌（目的菌）的生长。常用胆盐、煌绿、亚硫酸钠、亚shai酸钠及一些染料和某些抗生素等。 　　2.指示剂：在培养基中加入一定种类的指示剂，是为了观察细菌是否利用和分解培养基中的糖、醇类。常用的有酚红、中性红、甲基红、溴甲/酚紫、溴麝香草酚蓝、中国蓝等酸碱指示剂。亚甲蓝常用作氧化还原指示剂。

抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。这种反应既可在机体内进行，也可以在机体外进行。抗原抗体反应的过程是经过一系列的化学和物理变化，包括抗原抗体特异性结合和非特异性促凝聚两个阶段，以及由亲水胶体转为疏水胶体的变化。 由于抗体主要存在于血清中，在抗原或抗体检测中多以血清为试验材料，故将体外抗原抗体的免疫学反应也称作血清学反应(serological reaction)。该反应既可用已知的抗原检测未知的抗体，这是临床上常用的血清学诊断方法；也可用已知的抗体检测未知的抗原，如微生物及其代谢产物、激素、药物鉴定等的检测。

染色缓冲液（BSA）的配制： 　　PBS含有1% FBS和0.09% NaN3，置于冰上或4度冰箱备用。 　　准备单细胞悬液：淋巴组织、骨髓、血液或培养的细胞。 　　用冰染色缓冲液洗细胞2次，离心细胞，用冰染色缓冲液重悬细胞，使终浓度为2×107细胞/ml。 　　各取50ul（106细胞）细胞悬液到2个圆底的Ep管中。

细菌生长繁殖除需必要的营养物质外还需有适宜的环境，包括温度、酸碱度及气体等。 　　1、充足的营养 细菌的生长繁殖、新陈代谢必须有充足的营养物质才能提供其菌体所需的原料及能量。 　　2、适宜的温度 不同细菌对温度的要求不同，据此可分为嗜冷菌、嗜温菌、嗜热菌三种类型。病原菌均为嗜温菌，多数病原菌最适生长温度为35～37℃，少数病原菌如小肠结肠炎耶尔森菌最适温度为20～28℃，空肠弯曲菌最适温度为36～43℃。 　　3、适宜的酸碱度 各类一细菌对于生长环境中氢离子的浓度要求不同，多数在中性至弱碱性环境中酶活性高，生长良好，多数病原菌最适pH值范围为7.2～7.6，个别细菌如结核分枝杆菌最适pH值范围为6.5～6.8(偏酸性），霍乱/弧菌最适pH值范围为8.4～9.2（偏碱性）。因细菌在生长繁殖过程中可分解糖类产酸，使周围环境的pH值下降，故人工培养细菌时应加入缓冲剂，防止培养基酸碱度发生变化影响分离培养。

由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时，需要注意一点：培新配的培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右。