浅谈重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量
1.挑取转化有质粒的单菌落,接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中,37 oC,250rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10 ml(1:::20)选择性 LB 液体培养基中,37 oC,250 rpm/min 振摇培养至光密度(OD600=0.6)时,取 1 ml 样本作为诱导前标本,10000g 离心 1 min 收集菌体沉淀,-20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中,使 IPTG 终浓度为 1 mM,37 oC,250 rpm/min振摇培养 4~5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本,同上法收集菌体沉淀,-20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS(pH= 8.0)重悬,加入等体积的 2×SDS上样缓冲液,煮沸加热 5 min,SDS 聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离 ,考马斯亮蓝染色 3 小时后,脱色观察结果。
366 人阅读发布时间:2023-01-04 09:13