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培养细胞生长减慢这种情况可能的原因包括： 1．由于更换了不同培养液或血清，细胞需要重新适应。 2．试剂保存不当，培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。 3．培养物中有少量细菌或真菌污染。 4．接种细胞起始浓度太低。 5．细胞已老化。 6．支原体污染。

支原体是一种大小仅为0.2~0.3 um，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um）的原核生物，在细胞培养过程中，支原体感染发生率达到63%，因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染后，细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变，而细胞的生长率一般并未发生显著的影响，因而细胞被支原体污染一般难以察觉。

用于免疫荧光染色的染料需具备以下几个条件： 荧光染料应有较高的量子产额和消光系数； 荧光染料对488nm的激发光波长有较强的吸收； 发射光波长与激发光波长之间应有较大的波长差； 容易与被标记的单克隆抗体结合而不影响抗体自身的特异性。

1、冰冻切片制备：建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。 　　2、组织切片固定：切好片风干后立即用冰丙酮等固定液进行固定 5-10 min，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。 　　3、血清封闭：为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用血清（与二抗来源一致）封闭，减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的，一般 10-30 min。 　　4、一抗孵育条件：在免疫组化反应中最重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4℃ 、室温、37℃ ，其中 4℃ 效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般 37℃ 1-2 h，而 4℃ 过宿和从冰箱拿出后 37℃ 复温 45 min。具体条件还要摸索。

二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境，培养箱要求稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%)，来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。

细胞培养为何需要在CO2培养箱中？二氧化碳不仅是细胞生长的必需成分，还与维持培养液的pH有关。 细胞的体外培养需要理想的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2～7.4。在开放式培养中，以5%的二氧化碳气体比例为宜。

关于RNA提取时RNA降解的原因 　　1 ) 新鲜细胞： 　　裂解液的量不足，使得裂解不充分。 　　2 ) 新鲜组织： 　　某些含有内源性核酸酶的样品，很难避免RNA酶的降解，建议采用的方法为在液氮条件下将组织研碎，并且，匀浆时采用更多的裂解液。 　　3 ) 冷冻样品： 　　样品取材后应该迅速置于液氮中冷冻存放，然后转移到-70℃冰箱存放。如果未经液氮速冷直接转移到-70℃冰箱存放，会造成RNA缓慢降解。样品研磨后，在液氮刚刚挥发完时，将样品迅速转移到含裂解液的容器中，立即混匀匀浆。

配置微生物培养基需要： 　　1、根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。 　　2、注意各种营养物质的浓度及合适配比，保持合适渗透压。 　　3、将培养基的 pH 控制在适宜的范围之内，以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。 　　4、要注意各种原料的配比，每种培养基的配比合适的配比，可以按照老师的要求去做。 　　5、如需要加热的时候注意时间的把握。

蛋白酶抑制剂是什么？ 　　首先我们来了解蛋白酶： 　　蛋白酶是人类免疫缺陷病毒基因编码中的一种特异天冬酰蛋白酶，其作用是将基因和基因表达所产生的蛋白裂解，成为具有活性的病毒结构蛋白和酶。 　　蛋白酶抑制剂： 　　蛋白酶抑制剂，外文名（protease inhibitor），多肽类化合物。是基于肽类的化合物，它们或竞争性抑制蛋白酶活性或作为互补蛋白酶活性点的抑制剂。蛋白酶抑制剂是90年代中后期的新产品，药物合成工艺难度大。

缓冲溶液是无机化学及分析化学中的重要概念，缓冲溶液是指具有能够维持PH相对稳定性能的溶液。pH值在一定的范围内不因稀释或外加少量的酸或碱而发生显著的变化，缓冲溶液依据共轭酸碱对及其物质的量不同而具有不同的pH值和缓冲容量。 只要知道缓冲对的PH值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。 只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。

菌落总数检测1、为什么平板计数琼脂需要调节pH？由于大部分细菌是嗜中性的，培养基为符合细菌生长要求，需要调节pH至7.0±0.2，尽量保证较适宜的环境，确保检测结果的准确性。2、如何保证检测结果的有效性？

试验过程中，生物样本可能是最敏感的，因为它们的活性和特性依赖于合适的试验操作和贮藏条件。实验室菌种的处理和保藏的程序应标准化，使尽可能减少菌种污染和生长特性的改变。按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结果一致性的重要保证。（对于菌株的验收，复苏传代，使用，必须有规范化的程序，以保证菌株的标准特性） 微生物检验用的试验菌应来自认可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。（一般是ATCC国内也有CMCC，食品相关的CICC的菌株也可以。）

1.1实验用工器具的准备：检测过程中用到的玻璃平皿需灭菌(湿热灭菌121℃、30分钟或干热灭菌160℃、2小时)备用;剪刀、镊子等需先用纱布包好，外包牛皮纸包好扎紧，灭菌(湿热灭菌121℃、30分钟);移液管、枪头等用报纸包好扎紧，灭菌(湿热灭菌121℃、30分钟)。 1.2培养基及稀释液的准备：根据检验样品，计算出培养基与稀释液的用量，按照比例进行配置，包好，根据培养基与稀释液的属性，进行湿热灭菌，备用。 1.3洁净服准备：将当天所用洁净服放入灭菌锅中进行灭菌，备用;或使用已灭菌且在有效期内的洁净服。 1.4确保实验洁净区域通风，观察洁净室各个规定区域的压差是否符合规定，若不符合，及时通知设备部门，进行调整。

菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的菌落数。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆zui大的区别。而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。

检测蛋白的实验有很多种,WB实验和ELISA实验是比较常用的两种实验方法,这两种方法哪一种的实验结果更为可靠呢?有些人说ELISA自己包被抗体的话会比较麻烦，WB相比更加科学，容易被杂志接纳。但是血清中没有内参可以选择。是不是ELISA实验操作要简单很多，那么又如何来解决这样的一个问题呢？

过柱子，即柱层析或柱色谱的俗称，是有机化学中最常用也是最基础的一种分离手段。有机化学实验者最常做的三件事莫过于加反应、点板(TLC)和过柱子了，过完柱子拿到了纯的产品这个实验才算是告一段落了，当然之后一般还需要做一些其他的数据表征。作为一个几乎天天跟柱子打交道的有机化学实验者，有过把产物过没了的经历，也曾一根柱子过了两三天还舍不得丢掉，更有一个反应过了两三次柱子的情况，粗略估计差不多过了有上千根柱子。今天远慕整理一下过柱子的一些心得和体会，以供大家讨论和借鉴。

有时候工作做得再精细，检测结果却还是不让人满意。最后我们发现，原来一开始称量的时候，数据就是错的。那么造成实验室分析样品称量不精准的原因有哪些呢？总结来看，大体可分为分析天平没校准、分析天平安装不正确、环境及样品物理因素影响和操作不当等方面的原因。所以，称不准就从这几方面来找原因吧~

从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了，提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析，可供选择的方法非常多，乱花渐欲迷人眼，如何选择最适合的方法，成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。

在《医疗机构临床实验室管理办法》，《三级综合医院评审标准（2011 年版）》等文件中，都指出在临床检测报告的项目均应开展内部室内质控，并参加外部室间质评。在这两项工作当中，标准物质的作用尤为重要，对它的管控不可或缺。